Détection moléculaire par PCR

Détection moléculaire de Haemophilus ducreyi (chancre mou) par PCR.

L'échantillon de choix pour le diagnostic du chancre mou est un prélèvement par écouvillon fait à la base de l'ulcère génital. Un échantillon du bubon prélevé par aspiration est également acceptable.

Les échantillons qui ne constituent pas le bon type d’échantillon, dont le volume est insuffisant, ou qui ne sont pas accompagnés des renseignements pertinents sur le patient peuvent être rejetés.

Utilisez des écouvillons en Dacron ou en coton pour prélever les échantillons sur l’ulcère. La meilleure façon de prélever l’échantillon consiste à nettoyer la région en la rinçant à l’aide d’une solution saline physiologique stérile, puis à prélever les échantillons à la base de l’ulcère à l’aide d’un écouvillon en Dacron ou en coton. Vous pouvez également utiliser une seringue et une aiguille pour aspirer du pus du bubon à travers le tissu normal.

Les écouvillons peuvent être expédiés à sec OU dans 1 ml de milieu de transport universel (Copan International). Les prélèvements de bubons doivent être placés dans un tube stérile et expédiés congelés. Conservez les écouvillons congelés jusqu'à leur expédition en vue de leur analyse. Expédiez-les congelés sur de la glace carbonique.

L’expédition des prélèvements doit être confiée à une personne détenant un certificat de formation TMD, conformément au Règlement sur le TMD. Pour plus d’information sur la catégorisation des matières à des fins d’expédition, veuillez consulter la partie 2 de l’appendice 3 du règlement ou la section 3.6.2 du règlement de l’IATA sur les produits dangereux.

H. ducreyi est l’agent causal du chancre mou, une ITS qui se caractérise par un ulcère génital nécrosant lequel peut être associé à la formation d’une lymphadénite inguinale («bubon»).  Le chancre mou est endémique dans le Sud-est de l’Asie et en Afrique, mais survient occasionnellement dans les pays industrialisés, habituellement chez des individus qui ont voyagé dans ces régions endémiques ou dans des éclosions urbaines localisées impliquant souvent l’industrie du sexe. Les individus immunodéprimés (par ex. positif pour le VIH) peuvent être plus à risque d’être infectés par H. ducreyi.

Formulaire de demande de la Section des maladies bactériennes invasives : veuillez indiquer clairement sur le formulaire les micro-organismes pour lesquels vous sollicitez une analyse. Joignez toutes les informations cliniques pertinentes ainsi que la liste des examens déjà effectués.

Les échantillons en double ne devraient pas être soumis sans consentement préalable. Ils pourraient ne pas être traités. Les isolats prélevés chez un même patient à trois semaines d’intervalle sont considérés comme des échantillons en double.

L’ADN de tous les échantillons de H. ducreyi reçus au NML en vue d’un test PCR est initialement extrait à l’aide d’un kit disponible dans le commerce. Les résultats reposent sur des tests qPCR spécifiques à H. ducreyi ciblant le gène 16S rRNA hautement conservé et le gène « hémolysine » (hhdA) spécifique à H. ducreyi. Un échantillon est considéré comme positif pour H. ducreyi si l’un des deux tests PCR spécifiques à H. ducreyi est positif. L’échantillon fait également l’objet d’un test de détection de la RNase-P afin de s’assurer que l’extraction de l’ADN a bien abouti.

Un résultat de PCR positif, détectant la présence d’une séquence cible spécifique à un agent pathogène bactérien d’intérêt, indique la présence de celui-ci dans l’échantillon soumis.

Un résultat de PCR négatif indique l’absence d’ADN bactérien détectable dans l’échantillon, mais n’exclut pas une infection, car des résultats faussement négatifs peuvent survenir en raison : d’une inhibition des réactions de PCR, de la variabilité des séquences sous-jacentes aux amorces et sondes cibles, ou de la présence d’ADN bactérien en quantités inférieures à la limite de détection du test concerné.

Comme pour tout test de laboratoire, les résultats du test doivent être interprétés en tenant compte de l’ensemble des résultats cliniques et de laboratoire disponibles

14 jours civils. Les échantillons urgents ou associés à une éclosion seront considérés comme prioritaires et traités le plus tôt possible.

1. Alfa, M. The laboratory diagnosis of Haemophilus ducreyi.  Can J Infect Dis Med Microbiol.2005;16:31–34.
2. Lewis DA. Chancroid: clinical manifestations, diagnosis, and management. Sex Transm Infect. 2003;79:68-71.
3. Orle KA, Gates CA, Martin DH, Body BA, and Weiss JB. Simultaneous PCR detection of Haemophilus ducreyi, Treponema pallidum, and herpes simplex virus types 1 and 2 from genital ulcers. J Clin Microbiol. 1996;34:49–54.
4. Chen C, Ballard RC. The Molecular Diagnosis of Sexually Transmitted Genital Ulcer Disease. (2012) Diagnosis of Sexually Transmitted Diseases: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology  903:103-112.
5. Glatz M, et al. A multicenter prospective trial to asses a new real-time polymerase chain reaction for detection of Treponema pallidum, herpes simplex-1/2 and Haemophilus ducreyi in genital, anal and oropharyngeal ulcers. Clinical Microbiology and Infection (2014): 20:O1020-O1027.