Détection moléculaire du Mycobacterium leprae par PCR en temps réel

Détection par PCR en temps réel des espèces du Mycobacterium incluant M. leprae dans des échantillons cliniques au moyen de diverses cibles moléculaires.

Veuillez consulter le responsable du diagnostic NRCM et vous référer aux informations ci-dessous afin de déterminer si votre échantillon est adapté à ce type de test. Veuillez noter le volume et la qualité de l'échantillon à tester :
- Pour les tissus : les échantillons stériles frais, y compris les biopsies fraîches, sont préférables. L'échantillon doit être positif aux BAAR. Les échantillons congelés peuvent être acceptés à condition qu'ils aient été manipulés dans un environnement aseptique.
- Pour l'ADN : un minimum de 100 ng d'ADN est requis. L'ADN doit être mis en suspension dans un volume minimum de 25 ul d'eau/tampon de qualité moléculaire, accompagné d'une quantification de l'ADN dans les échantillons.

Échantillons cliniques positifs pour des bacilles acidorésistants, comme les tissus frais, le LCR ou les sédiments d’échantillons décontaminés. Il n’est pas recommandé de mener des essais avec des tissus fixés au formol en raison de la dégradation de l’ADN.

Veuillez expédier les échantillons cliniques, tels que les tissus frais, sur de la glace pour une livraison le lendemain, et avant le mercredi de chaque semaine afin de garantir leur réception avant le vendredi. Les échantillons préalablement congelés peuvent être expédiés sur de la glace sèche en respectant les procédures d'expédition appropriées pour le transport des matières dangereuses. Veuillez consulter le CNRM si vous avez besoin de plus amples informations.

L’expédition des prélèvements doit être confiée à une personne détenant un certificat de formation TMD, conformément au Règlement sur le TMD. Pour plus d’information sur la catégorisation des matières à des fins d’expédition, veuillez consulter la partie 2 de l’appendice 3 du règlement ou la section 3.6.2 du règlement de l’IATA sur les produits dangereux.

Veuillez consulter le CNRM avant de soumettre un échantillon en vue de la détection du M. leprae.  Veuillez noter les antécédents de voyage du patient.

Les réquisitions doivent être envoyées par courriel ou par télécopie avant l’expédition des isolats. Une requête adressée au CNRM ainsi qu’un formulaire de demande de détection du complexe Mycobacterium tuberculosis à partir des échantillons d’un patient doivent être remplis et signés par le superviseur ou la personne désignée du laboratoire provincial ou territorial soumettant l’échantillon. ]Ils doivent également inclure l’identifiant du laboratoire expéditeur (numéro de référence de l’échantillon), le sexe du patient, la date de naissance, les antécédents cliniques, les antécédents de voyage, la source de l’échantillon, les informations fournies par l’expéditeur concernant la microscopie, si elles sont disponibles, ainsi que toute autre information pertinente concernant l’échantillon soumis. Veuillez demander la détection de M. leprae dans la section « Identification et détection » de la requête d’analyse pour le CNRM. Le CNRM fournira les résultats au laboratoire provincial ou territorial ayant effectué l’envoi, lequel sera ensuite responsable de leur transmission au laboratoire local ou au médecin approprié.

Les échantillons peuvent être rejetés si leur volume est insuffisant ou si le motif et les documents pertinents sont incomplets ou manquants.  

En ce qui concerne M. leprae, la PCR en temps réel sera utilisée pour la détection de la région ITS et de la séquence répétitive RLEP unique.

10 jours civils.

1. Truman RW, Andrews PK, Robbins NY, Adams LB, Krahenbuhl JL, Gillis TP. Enumeration of Mycobacterium leprae using real-time PCR. PLoS Negl Trop Dis. 2008;2: e328. doi:10.1371/journal.pntd.0000328.